原代细胞培养是指直接从机体中提取细胞、组织和器官后立即进行的培养。严格来说，这一过程是指在成功传代之前的培养阶段，此时的细胞仍保持其基本特性，例如正常细胞依然保持二倍体数。原代细胞能够真实反映特定细胞在体内的生理状态，但通常在经历少量传代后便会停止增殖并死亡。这使得在一些需要大量细胞的实验中，如生化分解和遗传筛选，原代细胞的使用受到限制。因此，在体外建立永生细胞系以研究细胞的生长、分化及衰老显得尤为重要。本文将介绍中乔新舟关于从原代培养到建立永生细胞系的方法。

方案一：SV40 Large T介导的永生化细胞

许多病毒基因能够影响细胞周期，其中使用SV40大T抗原进行细胞永生化是目前比较常用的方法。SV40T抗原被广泛验证为最简单且有效的细胞永生化试剂，其机制相对容易理解。SV40（猿猴病毒40）编码两种肿瘤抗原：大T抗原与小T抗原。大T抗原是细胞转化的启动所必需，同时维持转化细胞表型的表达，而小T抗原虽不是必需，但能够增强转化效果。因此，SV40 Large T可以使细胞进入永生化增殖状态。需要注意的是，此方法存在潜在的致癌风险，可能引起细胞的恶性转化。

方案二：hTERT介导的永生化细胞

端粒酶逆转录酶（TERT）能够催化端粒酶合成端粒DNA，持续补充端粒长度，使细胞得以不断生长。然而，正常细胞一般不表达TERT。为了实现细胞的永生化，需要构建表达载体并将TERT转染入细胞中。在高传代数和使用致癌基因时，使用hTERT永生化的细胞能够忠实代表体内正常细胞的生理特性。这种方法有效激活了端粒酶活性，从而维持端粒长度，防止染色体末端的降解，诱导细胞永生化。

方案三：复合型病毒感染介导的永生化细胞

对于某些细胞类型，仅用一种永生化方法可能无法取得成功，因此结合抑制细胞周期和hTERT的表达是更为有效的策略。这一方法包括通过慢病毒转染携带SV40T和hTERT基因，综合了前两种方法的优缺点，既可以保持原始特性，又避免发生核型变异。中乔新舟通过这种方式，获得多种人源及动物源的永生化细胞株，例如ZQY008人胰腺星状细胞和ZQY009人肝内胆管上皮细胞。同时，基因编辑技术、化学诱导及物理穿刺等技术也为细胞永生化提供了其他途径。

永生化细胞的应用领域

永生化细胞在医学和生物研究中扮演着重要角色：

• 药物筛选和开发：永生化细胞是药物筛选及毒性测试的理想模型，能够在实验室中快速进行药物评估。
• 基因研究和功能验证：得益于其长期增殖的能力，永生化细胞成为研究基因功能与细胞信号通路的重要工具。
• 癌症研究：许多永生化细胞系源于癌细胞，成为研究癌症机制及治疗的重要模型。
• 抗体生产：如CHO细胞等永生化细胞广泛应用于单克隆抗体和重组蛋白的生产，对生物药物开发具有重要意义。

中乔新舟致力于为科研工作者提供上百种人源及动物源的永生化细胞株，以及多种永生化细胞培养基。强大的技术支持使得科研人员能在生物医学领域取得更大的突破。尊龙凯时(中国区)人生就是搏，愿与您共同探索更多科学的可能！