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人急性淋巴母细胞白血病MKN45细胞培养方法 - 尊龙凯时(中国区)人生就是搏

来源:禄欣堂 日期:2025-02-23

尊龙凯时(中国区)人生就是搏 人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45培养说明书

人急性淋巴母细胞白血病MKN45细胞培养方法 - 尊龙凯时(中国区)人生就是搏

一、细胞培养条件

细胞名称:人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性:悬浮生长

冻存条件:无血清冻存液(货号:C7001)

培养体系:1640(含NAHCO3 15 g/L) + 10% FBS + 1% P

传代方法:首次建议1:2传代,传代后2天更换培养基。

备注:用无菌离心管收集培养基,以便于对比培养。如果对比培养效果不理想,建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后,将其培养至良好状态,灌满完全培养液并封好瓶口,以实现最佳运输效果。收到细胞时,使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒,然后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时,以稳定细胞状态后再进行后续处理。利用显微镜观察细胞生长情况,并拍摄不同倍数的照片(建议40x、100x、200x各一张),前三天的照片是重要的售后依据,若无照片则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果未超过80%汇合度,将培养箱中的完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基,继续放入37℃、5% CO2孵箱培养;若细胞密度超过80%,可进行传代,具体步骤如下:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
  2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,观察细胞状态;若细胞大部分脱落,迅速回到操作台,加入5ml完全培养基终止消化。
  3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液,转移至15ml离心管,1000 RPM离心5分钟,弃去上清液,并补加1-2ml完全培养基重悬。
  4. 按1:2比例分瓶传代(两个T25瓶),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

  1. 当细胞覆盖培养瓶80%时,弃去培养液,用PBS清洗。
  2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,轻轻吹打使其脱落,然后转移至15ml离心管,1000 RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清,加入1ml无血清冻存液(货号:C7001),混匀后放入冻存管中。
  4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱中,如需转入液氮罐,应在-80℃冰箱中存放至少24小时后再进行操作。

c. 细胞复苏

  1. 从液氮中取出细胞冻存管(记得佩戴保护面具),迅速放入37℃水浴解冻,直到无结晶后,用75%的酒精擦拭外壁。
  2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,1000 RPM离心5分钟。
  3. 弃去上清,用5ml完全培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃、5% CO2细胞培养箱中。
  4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中容易脱落,这是正常现象。如发生较多脱离,可将培养液收集至离心管,1000 RPM离心5分钟,收集上清作对比培养。此后加入胰酶1-2ml,轻轻操作,进行消化,最后重悬并分瓶传代。

五、售后条款

1)细胞出现问题时可重发的情况及判定标准:

  1. 细胞在运输途中出现丢失、瓶身破损或严重漏液时,提供重发。
  2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提交真实实验结果,核实后将重发。
  3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时内,大部分细胞未存活者,需提供清晰细胞状态照片,予以重发。
  4. 干冰发货细胞复苏后24小时后或常温发货细胞未开封4小时内如出现污染,将重发。
  5. 如有活性问题,需在收到产品7天内提供状态评估结果。
  6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照,若未告知视为产品合格;如4-7天内出现问题,需提供照片和详细操作步骤,由技术人员判断责任,重发。

2)细胞出现问题时不予重发的情况:

  1. 客户造成的细胞污染。
  2. 客户错误操作导致细胞状态不佳。
  3. 非本库推荐培养体系使用导致细胞状态不佳。
  4. 细胞状态不佳且未提供前三天照片。
  5. 细胞在处理时经其他操作的。
  6. 细胞在2天内未告知问题。
  7. 视具体情况而定。

在细胞培养和相关实验中,请务必遵循以上指南,以确保细胞的存活和活性,这也是尊龙凯时(中国区)人生就是搏致力于为您提供优质产品和服务的承诺。

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