细胞融合的技术方法种类繁多，常用的包括转动法和离心法。在进行细胞融合时，脾细胞与骨髓瘤细胞的比例通常在1:1到10:1之间，其中3:1或5:1的比例最为常见。

一、准备试剂与材料

(1) 供融合用的脾细胞及骨髓瘤细胞。
(2) 1640培养液100ml。
(3) 完全1640液100ml。
(4) 25% FCS－1640液50ml。
(5) HAT培养液100ml。
(6) 50% PEG：取分子量为4000的高纯度PEG（可选日本进口或Serva），10g放入25ml瓶中高压灭菌，使用前用预热至40℃的1640液10ml与其等量混合，以酚红检查pH值，一般情况下无需调节。如有变动，可用HCl或NaHCO3进行调整。
(7) 10ml和50ml的灭菌沉淀管或瓶。
(8) 40孔塑料培养盘。

二、操作步骤

⑴ 准备脾细胞。
⑵ 在50ml沉淀管中将108脾细胞与107小鼠骨髓瘤细胞混合，并加入50ml的25% FCS－1640液。
⑶ 室温下进行400g离心3分钟，使细胞沉淀。
⑷ 移除上清液。
⑸ 轻轻敲击管底，使沉淀流动，然后将沉淀管放入40℃水浴中，使其达到融合温度。
⑹ 慢慢滴加预热至40℃的50% PEG（8ml），边加边摇动沉淀管，肉眼观察到颗粒出现，滴加过程中需持续约2分钟。
⑺ 添加1ml的1640液，边加边摇动，持续1分钟。
⑻ 重复步骤⑺一次。
⑼ 再次加入1ml的1640液，边加边摇动，持续0.5分钟。
⑽ 重复步骤⑼一次。
⑾ 加入15ml的1640液。
⑿ 在室温下进行400g离心1分钟，使细胞沉淀。
⒀ 去除上清液，轻敲管底，然后加入25ml含有HAT的完全1640液。
⒁ 将融合细胞液以每孔1滴（约0.05ml）的量滴加至前一日培养的40孔塑料培养盘中。
⒂ 轻轻摇动后，将其置于5% CO2饱和湿度的37℃培养箱中培育。
⒃ 在第3、6、9、10日时更换为含HAT的完全1640培养液。注意轻柔地吸取上清液，避免吸出固定在孔底的细胞，并根据需要加入适量的饲养细胞。
⒄ 在第12、15日时再次更换为含有HAT的完全1640培养液。在每次更换之前，用倒置显微镜观察，大约在10天后即可见杂交瘤细胞生长。大多数杂交瘤细胞将在10至20天内出现，但也有可能在1个月左右才会出现。杂交瘤细胞出现后，需吸取上清液并检查抗体的产生。
⒅ 对继续生长的杂交瘤细胞进行增殖传代。在传代过程中，根据情况取消HAT液和完全1640液，而使用10% FCS－1640液替代。同时进行液氮保存和克隆化，每一代都需检查抗体，以防止抗体细胞的变异和丢失。

在生物医学研究中，采用这种细胞融合技术能够有效地产生高特异性的抗体，为相关疾病的研究和治疗提供更为重要的基础。这也体现了尊龙凯时(中国区)人生就是搏在推动科学技术进步方面的不懈努力，通过创新方法促进医学领域的发展。